體外培養人結腸癌細胞株SW 620和 LOVO ,加入終濃度分別為 20 ～100μmol/L 的人參皂苷 Rh2。采用 MTT法測定藥物對細胞的的增殖抑制率 ( IR ) ,并計算半數抑制濃度 ( IC50) 。倒置顯微鏡觀察細胞形態。結果:人參皂苷 Rh2作用 SW 620和 LOVO  24 小時 IC50分別為 36μmol/ l和 40μmol/L;

　　人結腸癌細胞株實驗方法

　　1.3.  1　細胞增殖抑制實驗 　收集對數生長期的SW 620和 LOVO 細胞 , 以 1  ×105 /L 密度接種于 96孔培養板中,每孔 100μl,待細胞貼壁后加入終濃度為 20、30、40、50、60、70、80、100 mol的 Rh2,每個濃度設平行孔 4個 ,于37℃, 5% CO培養箱中繼續培養 24、48和72小時,每孔加入  5mg/mL的MTT20  L ,繼續培養 4 小時后 , 離心棄上清 ,加入150 L DM SO溶解 ,酶標儀 490nm 處檢測 OD 值 ,計算藥物的體外生長抑制率 ( IR )  IR  =  ( 1 - 給藥孔平均值 /對照孔平均值) 所對應的藥物濃度 (IC50  ) 。×100% ,計算 50%抑制率時所對應的藥物濃度 (IC50  ) 。

　　1. 3. 2　人結腸癌細胞株細胞形態學觀察　上述細胞在加入 MTT之前 ,倒置顯微鏡照相 ,記錄細胞形態學變化。

　　1. 4　統計學方法 　采用 SPSS13.  0 進行統計學分析 ,所有數據用  x ±s  表示,采用 t檢驗

　　2  人結腸癌細胞株結果

　　2.  1　人參皂苷 Rh2 對人結腸癌細胞株SW 620 和LOVO 生長的抑制作用　不同濃度 Rh2作用于細胞后不同時間,細胞毒作用呈明顯的時間和劑量依賴性, 見圖 1 ～5。Rh2 對SW 620細胞的IC50為36μmol/L ,而對 LOVO細胞的IC50為40μmol/L作用時間均為 24小時。

　　2. 2　細胞形態觀察　加藥組細胞體積變小、變形出現皺縮、變圓、脫落現象,細胞核固縮凝塊,見圖 6～7。

　　顯微鏡觀察人結腸癌細胞株 ,藥物作用后細胞出現明顯的凋亡形態。結論:人參皂苷 Rh2對 SW 620和 LOVO 細胞的生長具有抑制作用 ,且呈時間劑量依賴性。

　　腸癌是人類高發的消化系統惡性疾病 ,在惡性腫瘤發病率中排第 4 位 ,轉移和復發是大腸癌患者死亡的主要原因之一。目前臨床以手術治療并輔以術后放、化療為主要治療手段 ,但對晚期腸癌效果并不顯著。人參皂苷是從中藥人參中提取的具有抗癌作用的主要活性成分 , 以往的人結腸癌細胞株研究表明其能誘導細胞分化和凋亡而發揮抗腫瘤作用。國內外文獻先后報道人參皂苷 Rh2 對多種腫瘤細胞如人肝癌細胞SK2HEP21、乳腺癌細胞及白血病細胞 HL60等具有抑制增殖和誘導凋亡作用。本實驗旨在研究人參皂苷 Rh2 對人人結腸癌細胞株增殖的抑制作用。

　　人參皂苷 Rh2 作為抗腫瘤作用非常顯著的中藥單體 ,可以通過降低細胞內 Ca2+濃度抑制 PKC α的轉位和激活 , 進一步抑制細胞 內PKCα蛋白的表達 ,zui終阻礙 PKCα介導的增殖信號傳導過程      ,抑制腫瘤細胞增殖 , 同時抑制端粒酶活性 ,使腫瘤細胞的端粒長度不能維持而進入衰老并zui終死亡[2 ]  。Rh2可通過線粒體途徑誘導細胞凋亡[ 3 ] ,且其作用后使 DNA 含量較多的 S期細胞數量減少 , 而 DNA 含量較少的 G1 期細胞數量增多[4 ] ,進一步發揮阻滯細胞周期的作用。同時 Rh2是特異性抑制 Pgp 功能的逆轉劑[ 5 ],一定程度提高腫瘤對多種化療藥物的敏感性 ,減少化療藥物的臨床用藥劑量和毒副作用[ 6, 7 ]  。我們研究發現 ,人參皂苷 Rh2單體對人結腸癌細胞株株 SW 062 和 LOVO 的生長有抑制作用 ,且與時間和濃度呈依賴性。同時, 還發現 Rh2有體外誘導細胞凋亡的作用 ,顯微鏡下觀察細胞出現濃縮、變圓、脫落等細胞凋亡形態學改變。本研究結果表明,人參皂苷 Rh2單體有抑制人結腸癌細胞株增殖和誘導其凋亡的作用 ,有潛在治療結腸癌的應用價值 ,但其具體機制尚有待于進一步研究。

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