原代細胞

　　用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關)，再加上取材，成本等因素，通常會把培養的第一代到第十代以內的細胞統稱為原代細胞。

　　細胞系

　　原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質發生了改變且帶有癌變的特點，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

　　也有認為細胞系（cell line）指原代細胞培養物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續傳代的培養細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系（Finite Cell Line）、無限細胞系（Infinite Cell Line），因此，細胞系狹義的是指可連續傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株（Cell Strain）。

　　細胞系具有容易培養、種類多、價格便宜、無限傳代等優點，也非常容易在培養、凍存中發生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

　　動物細胞是生產治療性重組蛋白的強有力工具。為與小分子藥物區別開來，治療性蛋白、疫苗以及細胞治療產品統稱為生物制品。宿主細胞的選擇和改造對于提高產品的產量和質量來說至關重要。因此必須對細胞進行篩選，選出具有高表達量和良好生長特性的細胞。在此我們主要討論適用于大規模生產重組蛋白的細胞株的篩選。

　　工業上重組蛋白的制備主要有兩種方式：瞬時轉染和穩定轉染。瞬時轉染經常用于制備少量蛋白（多達克級）用于藥物開發早期的蛋白活性或動物實驗。瞬時轉染并不產生克隆細胞株，它只是暫時將編碼外源蛋白的質粒轉導入已有的細胞株里面（比如HEK293或COS細胞）。隨著細胞的分裂外源基因不斷丟失，蛋白產量較低，一般在1-100mg/L。近年來有報道稱HEK293細胞中瞬時表達產量可達1g/L。

　　與瞬時轉染不同，穩定細胞株是為工業化生產治療性蛋白而構建的。穩定細胞株需要具備在不同的時間，不同的場地以及不同的批次間生產相同質量產品的能力。在選定生產用細胞株之后，需要建立主細胞庫（mater cell bank）。從主細胞庫復蘇后，擴增建立工作細胞庫（working cell bank），工作細胞庫用于生產。細胞庫通常保存在液氮中，需要維持整個產品的生命周期。在構建生產用細胞株的過程中，宿主細胞和表達載體至關重要。

上一篇 : ATCC細胞的分類檢測是怎么完成的？    下一篇 :  ATCC細胞株購買運輸是關鍵

>> 返回首頁